Microbiología

Técnica de recuento bacteriano.

(UFC/mL)

Los estudios microbiológicos del suelo muestran que este es un excelente hábitat para numerosos microorganismos, en particular si esta cultivado o mejorado. En el suelo, medio natural para el desarrollo de las plantas, habitan comunidades diversas y complejas de algas, bacterias y hongos. Estos microorganismos, junto con los virus y los componentes de la microfauna (amebas, flagelados, nematodos, y otros) forman la microbiota del suelo y aunque se estima que existen unas 30.000 especies de bacterias y 1.500.000 hongos, solo se han identificado entre el 8% y 10%, respectivamente. Los microorganismos del suelo son los responsables de tomar y descomponer los compuestos orgánicos de origen vegetal y animal, que se incorporan en el suelo en virtud de acciones biológicas naturales, como los azúcares, aminoácidos, celulosa, ligninas, proteínas, grasas, ceras y pigmentos que dejan en libertad componentes orgánicos e inorgánicos solubles; algunos de los componentes inorgánicos sobre todo el amoníaco, pueden ser utilizados por los vegetales como fuente de nitrógeno.

La diversidad biológica de un suelo, está dada por la variedad y cantidad de especies de organismos que en él se encuentra, su análisis permitirá establecer el estado de sanidad o vitalidad que posee y posiblemente determine las clases de organismos que puedan causar algún tipo de daño a las especies que se tienen plantadas. Así mismo, ofrece pautas para establecer un manejo que busque la sostenibilidad en el agroecosistema. Si se tiene en cuenta que la microbiota del suelo es un recurso natural renovable y se analizan las funciones que los microorganismos son capaces de desarrollar en los sistemas suelo - planta, se deduce la trascendencia de los componentes biológicos del desarrollo sostenible en el contexto agroforestal. En efecto, hoy se acepta que la sostenibilidad tanto de los ecosistemas naturales como agroecosistemas, depende del equilibrio entre los componentes biológicos del suelo; razón por la cual la investigación en microbiología del suelo está adquiriendo un inusitado interés en el contexto de sostenibilidad de los sistemas suelo - planta. La rizosfera del suelo es una zona donde se desarrollan la interfase raíz - suelo y los microorganismos están en la interacción con las raíces de las plantas y los constituyentes del suelo.

RECUENTO DE MICROORGANISMOS POR DILUCIONES SERIADAS.

Frecuentemente las muestras en estudio tienen un número elevado de microorganismos, por lo tanto se requiere diluirlas para poder contarlos. Para ello se realizan diluciones seriadas, que posteriormente se siembran en placas con medio de cultivo.

Esta técnica de recuento nos permite conocer el número de microorganismos viables en una determinada muestra. La viabilidad en microbiología se define como la capacidad del microorganismo para multiplicarse en un medio sólido formando una colonia. Debemos tener en cuenta que las condiciones concretas del ensayo pueden limitar la capacidad de reproducción de algunas de las células viables de la muestra inicial. Es fundamental procurar que la viabilidad inicial no se vea afectada por el procedimiento experimental, intentando mantener los microorganismos en las mismas condiciones ambientales a la que están adaptados. También es muy importante no aumentar la carga microbiana inicial, por lo que todas las manipulaciones se deben realizar en condiciones de esterilidad.

El recuento se obtiene contabilizando el número de colonias en cada caja, se promedian y se multiplican por el inverso de la dilución, de esta forma se obtiene el número de unidades formadoras de colonia (UFC/g) en 20g de suelo. Para la identificación y evaluación de algunos géneros de bacterias se procede a la observación de las colonias, teniéndose en cuenta la morfología de la colonia, forma, color, aspecto de acuerdo con particularidades específicas.

PROCEDIMIENTO.

En esta parte vamos a poner cual es el procedimiento que se debe de hacer con una muestra para realizar el recuento bacteriano.

1. Homogenizar la muestra problema y pesarla.
2. En un erlenmeyer de 500mL, mezclar los gramos que se pesaron de la muestra problema con 180mL de agua destilada estéril y homogenizar.
3. Tomar 1mL de la muestra problema con una pipeta estéril y añadir a un tubo con 9mL de agua destilada estéril. Esta dilución es 1/10.
4. Agitar el tubo para homogenizar totalmente la suspensión. De esta forma hemos considerado diluir la muestra inicial 10 veces.
5. Repetir la operación a partir de la misma dilución para conseguir la dilución 10 a la -2, se transfiere al siguiente tubo 1mL, quedando una dilucion 10 a la -3 y así sucesivamente.
6. Sembrar al menos 2 placas de agar nutritivo (AN), con 0.1mL de cada una de las 3 últimas diluciones realizadas. Este inoculo debe extenderse de forma homogénea por toda la superficie de la placa, para lo cual se utiliza un rastrillo bacteriológico esterilizado.
7. Incubar las cajas 25 grados centígrados por 48 - 72 horas.
8. Contar las colonias de las placas que presentan un número entre 30 - 300, un número mayor de 300 colonias puede ser excesivo para poder contar exactamente.
9. Calcular con estos datos el número de UFC/g de la muestra.   

Microbiología y bioanalismo.